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蛋白質(zhì)提取與制備蛋白質(zhì)種類很多,性質(zhì)上的差異很大,既或是同類蛋白質(zhì),因選用材料不同,使用方法差別也很大,且又處于不同的體系中,因此不可能有一個(gè)固定的程序適用各類蛋白質(zhì)的分離。但多數(shù)分離工作中的關(guān)鍵部分基本手段還是共同的,大部分蛋白質(zhì)均可溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液中,少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)溶于乙醇、丙酮及丁醇等有機(jī)溶劑中。因此可采用不同溶劑提取、分離及純化蛋白質(zhì)和酶。
中藥提取罐的蛋白質(zhì)與酶在不同溶劑中溶解度的差異,主要取決于蛋白分子中非極性疏水基團(tuán)與極性親水基團(tuán)的比例,其次取決于這些基團(tuán)的排列和偶極矩。故分子結(jié)構(gòu)性質(zhì)是不同蛋白質(zhì)溶解差異的內(nèi)因。
溫度、pH、離子強(qiáng)度等是影響蛋白質(zhì)溶解度的外界條件。提取蛋白質(zhì)時(shí)常根據(jù)這些內(nèi)外因素綜合加以利用。將細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取出來。并與其它不需要的物質(zhì)分開。但動(dòng)物材料中的蛋白質(zhì)有些可溶性的形式存在于體液(如血漿、消化硫等)中,可以不必經(jīng)過提取直接進(jìn)行分離。蛋白質(zhì)中的角蛋白、膠原及絲蛋白等不溶性蛋白質(zhì),只需要適當(dāng)?shù)娜軇┫慈タ扇苄缘陌殡S物,如脂類、糖類以及其他可溶性蛋白質(zhì),昀后剩下的就是不溶性蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)經(jīng)細(xì)胞破碎后,用水、稀鹽酸及緩沖液等適當(dāng)溶劑,將蛋白質(zhì)溶解出來,再用離心法除去不溶物,即得粗提取液。
水適用于白蛋白類蛋白質(zhì)的中藥提取罐的抽提。如果抽提物的pH用適當(dāng)緩沖液控制時(shí),共穩(wěn)定性及溶解度均能增加。如球蛋白類能溶于稀鹽溶液中,脂蛋白可用稀的去垢劑溶液如十二烷基硫酸鈉、洋地黃皂苷(Digitonin)溶液或有機(jī)溶劑來抽提。其它不溶于水的蛋白質(zhì)通常用稀堿溶液抽提。
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